摘要目的 :比较 20例自体血清皮肤试验阳性的慢性荨麻疹病人、20例皮肤试验阴性的慢性荨麻疹病人及 20例不患有慢性荨麻疹的对照组对补体灭活血清的反应 ;分析抗炎药物对血清活性的作用。方法 :测定全血标本组胺的释放 ,嗜碱细胞表面活化标志物ＣＤ63的表达及血细胞悬液内硫化白三烯的产生。结果 :自体血清皮肤试验阳性的慢性荨麻疹病人血清不仅在组胺释放上明显高于皮肤试验阴性的慢性荨麻疹病人 ,而且嗜碱细胞表面ＣＤ63的表达及硫化白三烯的产生也明显高。然而其血清活性并无特征性。血清经氨苯砜、奎宁及利多卡因预先孵育后 ,其组胺释放、ＣＤ63的表达及硫化白三烯的产生均明显减少。此外 ,咪唑斯汀可抑制血清诱导的硫化白三烯的产生。结论 :对于这些药物体外作用的进一步研究将明确它们对于由血清引起炎性反应慢性荨麻疹病人的治疗作用。

　　慢性荨麻疹 (ＣＵ)是一种常见的皮肤病。其定义是风团反复发生至少 6周 ,甚至 10年以上 ,有时可伴发威胁生命的血管性水肿。由于瘙痒及失眠 ,病人的生活质量明显下降。近来发现抗甲状腺素、抗ＩｇＥ、尤其是抗高亲和力ＩｇＥ受体的自身抗体 (ＦｃεＲＩ)可能在ＣＵ的发病或病情活动上起重要作用。有假说认为这些自身抗体与肥大细胞或嗜碱细胞表面的ＦｃεＲＩα发生交联 ,导致组胺释放 (ＨＲ)。然而通过酶联免疫吸附 (ＥＬＩＳＡ)方法检测抗ＦｃεＲ自身抗体 ,发现这些抗体也存在于其他自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮及异位性皮炎中。此外 ,嗜碱细胞及肥大细胞诱发的血清活性只存在于一部分ＣＵ病人中 ,而并非存在于所有固有血清皮肤试验阳性的慢性荨麻疹病人中。显然这些非特异的自身抗体在荨麻疹的发生及发展中所起的作用还有待研究。

　　资料和方法

　　为了进一步明确ＣＵ患者的血清活性 ,我们对 20例自体血清皮肤试验 (ＡＳＳＴ)阳性的ＣＵ患者 , 20例ＡＳＳＴ阴性的ＣＵ患者及 20例对照人群其中包括 10例异位 (ＡＴ)志愿者的ＨＲ、嗜碱细胞表面ＣＤ63的表达及白细胞硫化白三烯 (ＳＬＴ)的产生进行测定 ,并研究了多种抗炎药对血清活性的作用。发现经典的非嗜睡性抗组胺药对自身免疫性荨麻疹的疗效不佳。

　　结果

　　一 .全血的组胺释放活性

　　异位志愿者 (Ｄ＿(ＡＴ))由抗ＦｃεＲＩ单抗及抗ＩｇＥ单抗引起的净组胺释放值要比非异位志愿者 (Ｄ＿(ＮＡＴ))高得多 (分别为Ｐ <0. 01及Ｐ<0. 01)。ＡＳＳＴ阳性的ＣＵ患者 ,其高释放志愿者血清的净组胺释放值要明显高于ＡＳＳＴ阴性的ＣＵ患者及Ｄ＿(ＮＡＴ)和Ｄ＿(ＡＴ)。血清活性与剂量相关 ,在 1∶2稀释度下 ,引起的血清净组胺释放值最高。然而 ,通过血清引起的ＨＲ并不能区分ＣＵ、Ｄ＿(ＮＡＴ)和Ｄ＿(ＡＴ)。对于Ｄ＿(ＮＡＴ)ＡＳＳＴ阳性ＣＵ患者血清的净ＨＲ值有高于ＡＳＳＴ阴性ＣＵ的血清及对照血清的趋势 ,但并无显著性差异。ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清在 1∶10稀释时 ,其净ＨＲ值明显高于ＡＳＳＴ阴性ＣＵ血清。与抗ＦｃεＲＩ单抗 (0. 66μｇ/ｍｌ)的活性相比 ,Ｄ＿(ＡＴ)患者的ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清活性要低 2. 7倍 ,而Ｄ＿(ＮＡＴ)患者要低 2倍。而与抗ＩｇＥ单抗 (1∶1000)相比 ,Ｄ＿(ＡＴ)要高出1. 4倍 ,Ｄ＿(ＮＡＴ)要高出 4倍。

　　二 .嗜碱细胞表面ＣＤ63表达的诱导

　　经抗ＦｃεＲＩ单抗及Ｎ─甲酰─甲硫氨酸─ｌｅｕｃｙｌ─次苯基 (ＦＬＭＰ)刺激后 ,Ｄ＿(ＡＴ)表达ＣＤ63的细胞要明显多于Ｄ＿(ＮＡＴ)(Ｐ值分别为 <0. 01及 0. 01)。用ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清刺激后 ,Ｄ＿(ＡＴ)对ＣＤ63的表达要比Ｄ＿(ＮＡＴ)高2倍。这也说明Ｄ＿(ＡＴ)表达ＣＤ63的能力要高于Ｄ＿(ＮＡＴ)。在ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清中 ,Ｄ＿(ＡＴ)表面活性标志物ＣＤ63的表达要明显高于ＮＡＴ及ＡＴ对照组。然而 ,只有Ｄ＿(ＮＡＴ)ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清与ＡＳＳＴ阴性ＣＵ血清对照时 ,其诱导作用才有显著性差异 ,而与ＮＡＴ或ＡＴ相比较时则无显著差异。在两组志愿者中 ,血清活性均与剂量相关。ＣＤ63出现最高表达的浓度为 1∶2。与抗ＦｃεＲＩ单抗(0. 33μｇ/ｍｌ)相比 ,ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血活活性在ＤＡＴ要低 1. 6倍 ,在Ｄ＿(ＮＡＴ)要低 3. 3倍。与ＦＭＬＰ(1μｍｏｌ/Ｌ)相比 ,ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清活性在Ｄ＿(ＡＴ)要低 1. 2倍 ,而在Ｄ＿(ＮＡＴ)要低 2. 5倍。

　　三 .ＳＬＴ的产生

　　经抗ＦｃεＲＩ单抗刺激后 ,Ｄ＿(ＡＴ)的ＳＬＴ释放要明显高于Ｄ＿(ＮＡＴ)(Ｐ <0. 05)。然而将异位及非异位志愿者的血活活性进行比较时 ,此差异并不显著。相反 ,使用非热灭活血清时 ,Ｄ＿(ＮＡＴ)的ＳＬＴ释放只稍高于ＡＳＳＴ阴性ＣＵ及对照组。总之 ,未经热灭活血清其ＳＬＴ的产生明显高于经热灭活的血清。这也许提示血清中补体成分及抗ＩｇＥ自身抗体可能起一定作用。然而 ,经热灭活的Ｄ＿(ＡＴ)血清 ,如同未灭活的ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清 ,其ＳＬＴ的产生明显高于ＡＳＳＴ阴性ＣＵ血清、ＮＡＴ及ＡＴ血清。Ｄ＿(ＮＡＴ)血清诱导的ＳＬＴ产生 ,与ＡＴ血清相比 ,无统计学差异。与未经热灭活的ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清比较 ,则后者ＳＬＴ产生明显升高 ,差异有显著性。与抗ＦｃεＲＩ单抗 (0. 55μｇ/ｍｌ)的作用相比 ,使用热灭活血清 ,Ｄ＿(ＡＴ )的ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清活性要低 11. 7倍 ,在Ｄ＿(ＮＡＴ)则低 1. 7倍。

　　四 .ＨＲ、ＣＤ63表达及ＳＬＴ产生的关系对ＨＲ、ＣＤ63表达及ＳＬＴ产生的测定表明 ,并非所有ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清均有活性。相当一部分血清仅具有一种或两种活性。总的看来 , 25%的Ｄ＿(ＡＴ)及 30%的Ｄ＿(ＮＡＴ)血清无任何活性作用 ,尽管它们的ＡＳＳＴ均为阳性。比较ＨＲ与ＣＤ63表达、ＨＲ与ＳＬＴ的产生、及ＣＤ63表达与ＳＬＴ产生均无明显的相关性。然而 ,ＡＳＳＴ阳性ＣＵ血清活性似乎与荨麻疹的高活性相关 ,表现为每日症状频发及血管性水肿的发生。在ＡＳＳＴ阳性ＣＵ患者 , 75%的人每日出现症状 , 40%的人发生血管性水肿 ;而在ＡＳＳＴ阴性ＣＵ患者 ,仅 45%的人每日出现症状 , 15%的人发生血管性水肿。ＣＵ的持续时间 (ＡＳＳＴ阳性ＣＵ为 40± 57个月 ,ＡＳＳＴ阴性ＣＵ为 41± 14个月 )与血清活性或ＡＳＳＴ阳性并无关系。一个有意义的发现是 ,在具有血清活性的愚者 ,抗甲状腺抗体亦增高但并无显著性差异 (在ＡＳＳＴ阳性ＣＵ为 35%,在ＡＳＳＴ阴性ＣＵ为 15%)。ＡＳＳＴ阳性ＣＵ患者血清总ＩｇＥ水平 (68ｋＵ/Ｌ)比血清ＡＳＳＴ阴性ＣＵ患者 (119ｋＵ/Ｌ)要低 ,但统计学上并无显著性差异。

　　五 .抗炎药的抑制作用

　　ＣＵ患者的血清用氯喹 (1ｍｍｏｌ/Ｌ)、氨苯砜 (1ｍｍｏｌ/Ｌ)及利多卡因 (1ｍｍｏｌ/Ｌ)进行短时间的孵育后 ,ＨＲ、ＣＤ63表达及ＳＬＴ产生均明显受到抑制 ,且与剂量相关。咪唑斯汀 (200μｇ/ｍｌ)对ＳＬＴ的产生有显著的抑制作用。台盼蓝染色测定发现这些抗炎药的浓度并无细胞毒性。另外一项试验表明上述抗炎药物还可抑制Ｄ＿(ＡＴ)患者ＦｃεＲＩ单抗导致的ＨＲ、嗜碱细胞表面ＣＤ63表达及ＳＬＴ的产生。

　　讨论

　　上述数据证实了以前文献中所报道的结果 ,即并非所有ＣＵ病人 ,甚至并非所有ＡＳＳＴ阳性ＣＵ病人其血清具有ＨＲ活性。Ｈｉｄｅ等发现 ,当采用人嗜碱细胞时 , 65%的ＡＳＳＴ阳性ＣＵ病人血清有组胺释放。Ｆｉｅｂｉｇｅｒ等发现37%的ＣＵ病人血清中有抗ＦｃεＲＩ单抗 ,但并未作ＡＳＳＴ。他们发现 ,组胺释放活性在抗ＦｃεＲＩ自身抗体阳性的ＣＵ中 66%阳性 ,在自身抗体阴性的ＣＵ中 17%阳性。根据他们的标准 (ＨＲ > 15%的抗ＦｃεＲＩ单抗阳性对照组 ),在本研究中我们发现 ,在ＡＳＳＴ阳性ＣＵ患者中有 55%具有ＨＲ活性 ,而在ＡＳＳＴ阴性ＣＵ患者中为 15%,在异位对照组中为 30%,在非异位对照组中为 10%(根据Ｄ＿(ＡＴ)供者分析 )。尽管我们的研究是对全血ＨＲ活性的测定 ,而不是针对富含嗜碱细胞的白细胞悬液 ,然而ＣＵ患者血清ＨＲ活性的发生率与文献资料是一致的。

　　我们的数据表明在较严重和伴发血管性水肿或每天发作的荨麻疹患者 ,容易出现血清的组胺释放活性。而且 ,血清产生的嗜碱细胞ＣＤ63表达和ＳＬＴ产生在严重荨麻疹患者中更常见。不过 ,尽管血清产生的ＨＲ、ＣＤ63表达和ＳＬＴ产生在ＡＳＳＴ阳性的ＣＵ患者中更常见 ,但这些活性并不是ＡＳＳＴ阳性ＣＵ或所有ＣＵ患者所特有的。

　　然而 ,我们的资料显示 ,血清产生的嗜碱细胞表面ＣＤ63表达和ＳＬＴ的释放在未患慢性荨麻疹的异位志愿者和非异位对照组中也有发现。

　　综上所述 ,ＣＵ血清活性产生的ＨＲ、ＣＤ63表达和ＳＬＴ产生不能作为ＣＵ的诊断指标 ,但是可以提示 :这样的ＣＵ患者可能病情较重和有自身免疫致病性。这样 ,我们发现的ＡＳＳＴ阳性ＣＵ患者血清中存在有抗甲状腺抗体是具有一定意义的。 35%的ＡＳＳＴ阳性ＣＵ患者体内有抗甲状腺自身抗体 ,而ＡＳＳＴ阴性ＣＵ患者中仅为 15%。尽管这种差异没有统计学意义 ,但是很明显的一点是在普通人群中抗甲状腺自身抗体的发生率小于 6%。表明在ＡＳＳＴ阳性的ＣＵ亚群可能是一个自身免疫性疾病。

　　以前治疗这些患者的方法包括血浆置换或大剂量静脉注射免疫球蛋白 ,但都只能获得临时的效果。在本研究中 ,我们发现氯喹、氨苯砜、利多卡因和咪唑斯汀 4种抗炎药物对血清引致的炎症反应具有明显的抑制作用。但只有咪唑斯汀对血清产生的ＳＬＴ有明显的抑制作用。咪唑斯汀与第二代抗组胺药一样 ,无镇静作用 ,此外还有抗炎作用 ,包括抑制中性粒细胞游走 ,通过抑制 5-脂氧合酶而对白三烯起拮抗作用。咪唑斯汀治疗过敏性鼻炎和ＣＵ均有效。

　　总之 ,本项研究结果明确表明 :ＡＳＳＴ阳性的ＣＵ患者 ,不仅有ＨＲ的血清活性 ,而且也能引起嗜碱细胞ＣＤ63表达和ＳＬＴ产生。但是 ,临床表现与ＣＵ血清活性的相关性以及为何只累及到皮肤 ,而未累及到鼻与肺脏还远未弄清。除了氨苯砜、利多卡因、氯喹和羟基氯喹外 ,咪唑斯汀也可考虑用于治疗自身免疫性荨麻疹 ,这主要是因为其显著的低毒性。需要作进一步的对比研究以阐明这些抗炎药物在治疗通过ＨＲ ,嗜碱细胞表面ＣＤ63表达和ＳＬＴ产生而表示具有血清洁性的ＣＵ患者的潜在效果。