在由美国肿瘤研究院 (ＣＲＩ)前不久在纽约举办的“肿瘤疫苗 2003”年会上 ,Ｌｕｄｗｉｇ肿瘤研究所(ＬＩＣＲ)瑞士洛桑分中心的Ｊｅａｎ -ＣｈａｒｌｅｓＣｅｒｏｔｔｉｎｉ博士报告了当前肿瘤疫苗研究中的热点问题之一———利用Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1抗原研发肿瘤疫苗的研究进展。

　　Ｃｅｒｏｔｔｉｎｉ博士介绍说 ,Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1是分化肿瘤抗原类别中具有代表性的成员。它表达于正常的黑素细胞和大多数原发及转移的黑色素瘤中。Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ基因编码一个包含11 8个氨基酸的Ⅲ型蛋白 ,主要定位于内质网和高尔基网络中。到目前为止 ,它的主要功能仍然是未知的。现在 ,一个人类白细胞抗原 (ＨＬＡ)-Ａ2限制性的免疫决定簇已经被发现位于第 26～ 35号氨基酸残基 ,定位在假象的转膜区中。他们设计了该抗原的单个氨基酸突变的多肽类似物以增强抗原性和免疫原性 ,并用对血清中的蛋白酶较为稳定的非天然氨基酸替代了其中的两个氨基酸残基。

　　■免疫反应的双重性

　　在研究中 ,Ｃｅｒｏｔｔｉｎｉ博士等人用各种分析方法 ,包括使用荧光标记的ＨＬＡ -Ａ2/多肽类似物多聚体 (四聚体 ),详细研究细胞毒性Ｔ淋巴细胞 (ＣＴＬ)对Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1抗原反应 ,发现在人类胸腺阳性选择后外周血中保存了大量Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1特异性ＣＤ8+Ｔ细胞 ;而且大多数健康ＨＬＡ -Ａ2个体外周血中这类Ｔ细胞的频数很高。他指出 ,这些Ｔ细胞在正常机体中保持不活化的状态 ,使得皮肤黑色素细胞中虽表达了这种抗原 ,却不被免疫系统识别 ,相当于免疫逃避现象。相反 , 2/3ＨＬＡ -Ａ2黑色素瘤转移的患者Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1特异性Ｔ细胞在体内有增殖和分化。高亲和性、抗原刺激过的特异性ＣＴＬ移行并聚集于肿瘤部位。

　　然而 ,他们已经观察到 ,虽然从外周血单核淋巴细胞中取样时这些细胞功能完全 ,但从肿瘤局部获得的这些细胞在对抗原特异性反应过程中产生的干扰素 (ＩＦＮ)-γ产量减少 ,即其杀伤功能受到抑制。此外 ,对残余在转移淋巴结处的Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1特异性的Ｔ细胞 ,而不是那些残存在血液或皮下或内脏转移灶的细胞 ,他们还没有被检测到穿孔素ｍＲＮＡ和蛋白。在肿瘤细胞和细胞因子存在的情况下 ,这些细胞一旦从肿瘤组织中释放且转移到体外培养 ,它们能够在进行增殖之前迅速恢复正常的功能活性。

　　■临床试验初见成效

　　Ｃｅｒｏｔｔｉｎｉ博士等人已经开始用天然或是替代的多肽类似物加上免疫佐剂在黑色素瘤患者中进行疫苗的Ⅰ、Ⅱ期临床施试验。他们的策略是快速检测各种参数 ,如剂量、给药途径、分子佐剂的类型 ,在定性和定量检测Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1抗原特异性ＣＤ8+Ｔ细胞反应的基础上 ,选择免疫原性强的疫苗。在大多数患者中Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1抗原系统提供的惟一优势是存在可体外用荧光四聚体直接测量的特异性Ｔ细胞基线频数。因此 ,在测量这个反应之前没有必要使用任何体外扩增步骤。他们正在将实验室免疫监测标准化以期达到医疗诊断程序的标准 (高度可重复性、较低的个体差异性、能够区别反应患者和非反应患者的域值 )。

　　他们分析了外周血中抗原特异性ＣＤ8+Ｔ细胞的四个参数 :ＩＦＮ -γＥＬＩＳＰＯＴ形成细胞的频数 ,四聚体标记的ＣＤ8+Ｔ细胞的频数和其中表达细胞表面ＣＤ45ＲＡ和ＣＤ28分子的细胞比例。

　　疫苗免疫后有反应患者的每个参数的值相对于免疫前值的变化被转换成一种复合的分值来衡量特异性Ｔ细胞活性增加的程度。他们用矿物油来源的佐剂乳化抗原肽后免疫 17位患者 ,其中 12位检测到了抗原特异性ＣＤ8+Ｔ细胞有统计学意义的激活 ;与疫苗注射部位皮肤ＤＴＨ反应极为相关的Ｔ细胞反应 ,提示了免疫监测数据和体内进行的免疫性有相关性 ;大于 9 0%的反应者中反复的疫苗免疫能加强Ｔ细胞活性。虽然对所有患者免疫的都是Ｍｅｌａｎ -Ａ和流感多肽的混合物 ,但是这两种抗原的应答是独立发生的。因此 ,无应答是抗原特异性的而不是患者特异的。

　　令人感兴趣的是 ,在那些免疫前已存在被激活的抗原特异性ＣＤ8+Ｔ细胞的患者中有意义的疫苗应答更为常见。因此 ,肿瘤来源抗原的内源性刺激对免疫治疗后观察到的Ｔ细胞激活起到了一定作用。这和Ｔ细胞激活是一个需要几个触发步骤的过程是一致的 ,说明用矿物油来源的佐剂乳化抗原肽制成的疫苗能够促进这些步骤中的一些但不是全部。

　　在疫苗诱导的Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1抗原特异性Ｔ细胞应答中仍然被用作评估的一个基本参数是反应性Ｔ细胞的亲和力。迄今为止 ,ＴＣＲ亲和力的估计仍依赖于间接的功能分析。变异四聚体的实用性为发展ＴＣＲ亲和性的直接分析提供了可能。他们已经开发了新的ＭＨＣⅠ /多肽四聚体以显现低、中、高亲和性的Ｔ细胞。

　　Ｃｅｒｏｔｔｉｎｉ博士表示 ,Ｍｅｌａｎ -Ａ/ＭＡＲＴ - 1多肽制成的疫苗引起的应答为体外监测提供了精确的体内Ｔ细胞扩增的定量数据和Ｔ细胞分化的定性信息。这种方法允许他们快速检测新疫苗的设计和判断能否激活未活化的Ｔ细胞并促进其分化成完全活化的效应Ｔ细胞。这些Ⅰ、Ⅱ期临床试验为随后大规模Ⅲ期试验的临床功效检测中选择理想疫苗奠定了基础。